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淺看免疫組化技術(shù)服務(wù)的切片制備

更新時間:2021-12-20      點(diǎn)擊次數(shù):567
 
  免疫組化技術(shù)服務(wù)是伊萊博生物實驗組成之一,作為常見實驗,日常實驗之一。該實驗由從事動物實驗專業(yè),經(jīng)驗豐富的人員進(jìn)行操作。免疫組化,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理—抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究方法。
  免疫組化技術(shù)服務(wù)的切片制備:
  1、洗載玻片:將載玻片置于重鉻酸鉀和濃H2SO4混合液中,目的是為了將載玻片上的硅膠等除去,同時使一些肉眼看不見的凹凸不平的表面變平整,便于組織吸附,然后置于清水中清洗,除去殘余的重鉻酸鉀和濃H2SO4(大約沖一個小時左右),再將載玻片浸泡于酒精之中,然后放到架子上,置于37°C溫箱中,將多聚賴氨酸涂布于玻片的表面,由于Lys帶正電,而大多數(shù)的組織帶負(fù)電荷,從而產(chǎn)生吸附作用。
  2、包埋組織:先在鐵模具中加入一些液態(tài)石蠟,先稍微冷卻,然后再將待包埋的組織置于石蠟之中,并排列整齊,再將塑料模具盒蓋上,后加入少許液體石蠟,進(jìn)行冷凍,使石蠟變成固態(tài)。
  3、切片:將包埋好的組織從模具上取下來,并置于石蠟切片機(jī)上,切片機(jī)通過調(diào)節(jié)上下左右來使組織和切割方向一致,然后調(diào)節(jié)切片的厚度,一般為5mm,如果比較難切,則可以適當(dāng)調(diào)整厚度。用小鑷子將包含有完整組織的載玻片置于40°C溫水中。
  4、撈組織:當(dāng)組織載玻片置于40°C溫水中之前,要先將水浴中的氣泡趕走,以免氣泡受熱上浮而貼到組織上,組織受熱展開,好是組織不起皺紋,用載玻片撈組織時,一般取載玻片的下1/3或者下1/2一般每種組織撈5-6張,其中2-3張是備用的,每張載玻片上通常撈兩份組織,做對照使用,這樣形成的誤差就比較小了,而且撈載玻片的時候好方向一致,以便觀察,再將撈出來的載玻片置于架子上,放入37°C溫箱中烘干。
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